لیپوفکتامین ۳۰۰۰ (Lipofectamine 3000) | کد L3000-008 | برند Invitrogen/Thermo Fisher

بخش فارسی

مروری جامع بر محصول

لیپوفکتامین ۳۰۰۰ (Lipofectamine 3000) یک کیت انتقال ژن (Transfection Reagent) مبتنی بر نانوذرات لیپیدی است که توسط شرکت Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) با کد کاتالوگ L3000-008 (حجم ۰.۷۵ میلی‌لیتر) عرضه می‌شود . این کیت شامل دو جزء اصلی است: لیپوفکتامین ۳۰۰۰ (لیپیدهای کاتیونی) و P3000™ Enhancer (افزایش‌دهنده) که برای دستیابی به بالاترین کارایی انتقال ژن در طیف گسترده‌ای از سلول‌ها، به ویژه سلول‌های سخت‌ترانسفکت (Hard-to-Transfect) طراحی شده است .

این کیت به عنوان یک استاندارد طلایی در آزمایشگاه‌های زیست‌شناسی مولکولی شناخته می‌شود و برای انتقال پلاسمید DNA، siRNA و کو-ترانسفکشن (همزمان DNA و RNA) کاربرد دارد . گروه شرکت‌های کیمیاگستر و فروشگاه اینترنتی مارکت شیمی به آدرس marketchemi.ir، این محصول را با تضمین اصالت کالا از برند Invitrogen در اختیار محققان قرار می‌دهند.

مبانی علمی و مکانیسم اثر

نقش P3000™ Enhancer

برخلاف لیپوفکتامین ۲۰۰۰، کیت لیپوفکتامین ۳۰۰۰ دارای یک جزء اضافی به نام P3000™ است. این ماده دو نقش کلیدی در ترانسفکشن DNA ایفا می‌کند :

1. فشرده‌سازی DNA (DNA Condensation): P3000 با بار مثبت بالا، مولکول DNA (که به طور طبیعی یک مارپیچ باز و حجیم است) را فشرده کرده و به ذرات کوچک‌تر و متراکم‌تری تبدیل می‌کند. این کار باعث می‌شود DNA راحت‌تر توسط لیپیدها包裹 شده و وارد سلول شود.

2. افزایش بار مثبت کمپلکس: P3000 بار مثبت کل کمپلکس را افزایش می‌دهد که تعامل آن با غشای سلولی (با بار منفی) را بهبود بخشیده و نرخ اندوسیتوز (ورود به سلول) را بالا می‌برد.

نکته حیاتی: P3000 فقط برای ترانسفکشن DNA استفاده می‌شود. در ترانسفکشن siRNA، به دلیل کوچک بودن اندازه siRNA و نیاز به آزادسازی آن در سیتوپلاسم (نه هسته)، نباید از P3000 استفاده کرد، زیرا فشرده‌سازی بیش از حد و بار مثبت قوی می‌تواند عملکرد siRNA را مختل کند .

مشخصات فنی کیت

پروتکل استاندارد ترانسفکشن (برای پلیت ۲۴ چاهک)

پروتکل زیر بر اساس دستورالعمل رسمی Thermo Fisher برای یک چاهک از پلیت ۲۴ چاهک ارائه شده است :

۱. آماده‌سازی سلول‌ها:

• یک روز قبل از ترانسفکشن، سلول‌ها را در پلیت ۲۴ چاهک با تراکم مناسب (معمولاً ۵۰ تا ۷۰ درصد) بکارید تا در روز ترانسفکشن به ۷۰ تا ۹۰ درصد Confluency برسند .

۲. آماده‌سازی محلول‌ها (در دو لوله جداگانه):

• لوله ۱ (لیپید): ۲۵ میکرولیتر Opti-MEM™ را با ۰.۵ میکرولیتر (برای کارایی بالا) یا ۱.۵ میکرولیتر (برای سمیت پایین‌تر) لیپوفکتامین ۳۰۰۰ مخلوط کنید .

• لوله ۲ (DNA): ۲۵ میکرولیتر Opti-MEM™ را با ۵۰۰ نانوگرم DNA و ۱ میکرولیتر P3000™ مخلوط کنید .

۳. تشکیل کمپلکس:

• محتویات لوله ۲ را به لوله ۱ اضافه کنید (نسبت ۱:۱) و به آرامی مخلوط کنید.

• مخلوط را به مدت ۱۰ تا ۱۵ دقیقه در دمای اتاق انکوبه کنید .

۴. افزودن به سلول‌ها:

• ۵۰ میکرولیتر از کمپلکس حاصل را به هر چاهک حاوی سلول و محیط کشت اضافه کنید.

• پلیت را به آرامی تکان دهید تا کمپلکس به طور یکنواخت پخش شود .

۵. تحلیل نتایج:

• سلول‌ها را به مدت ۲۴ تا ۴۸ ساعت در انکوباتور ۳۷ درجه سانتی‌گراد نگهداری کنید و سپس بیان ژن یا پروتئین را بررسی کنید .

کاربردهای تحقیقاتی

• بیان پروتئین نوترکیب: انتقال پلاسمیدهای حاوی ژن‌های مورد نظر برای تولید پروتئین در سلول‌های HEK293 یا CHO.

• آزمایش‌های گزارشگر (Reporter Assays): انتقال پلاسمیدهای لوسیفراز یا GFP برای بررسی فعالیت پروموتر.

• ویرایش ژنوم (CRISPR/Cas9): انتقال پلاسمیدهای CRISPR برای ایجاد جهش یا knock-in در سلول‌های هدف .

• تولید ویروس (Lentivirus): تولید ذرات لنتی‌ویروسی با تیتر بالا با هم‌ترانسفکشن پلاسمیدهای بسته‌بندی در سلول‌های 293T .

• سرکوب ژن (RNAi): انتقال siRNA یا shRNA برای کاهش بیان ژن‌های هدف (بدون استفاده از P3000) .

نکات کلیدی و عیب‌یابی

• سلول‌های سخت‌ترانسفکت: برای سلول‌هایی مانند سلول‌های اپیتلیال اولیه، فیبروبلاست‌ها و برخی سلول‌های بنیادی، استفاده از ۱.۵ میکرولیتر لیپوفکتامین (به جای ۰.۵ میکرولیتر) و نسبت DNA به لیپید بالاتر توصیه می‌شود .

• سمیت سلولی: در برخی سلول‌ها (مانند سلول‌های HBE)، استفاده از لیپوفکتامین ۳۰۰۰ ممکن است باعث کاهش زنده‌مانی و افزایش التهاب شود. در صورت مشاهده سمیت، می‌توانید ۴ تا ۶ ساعت پس از ترانسفکشن محیط را تعویض کنید یا از مقدار کمتری لیپید استفاده کنید .

• محیط بدون آنتی‌بیوتیک: توصیه می‌شود در حین ترانسفکشن از محیط بدون آنتی‌بیوتیک (مانند penicillin/streptomycin) استفاده کنید تا کارایی افزایش یابد.

• عدم فریز کردن: کیت باید در یخچال (۲-۸ درجه) نگهداری شود و فریز کردن باعث از بین رفتن کارایی لیپیدها می‌شود .

ایمنی و احتیاط‌ها

• طبقه‌بندی: لیپوفکتامین ۳۰۰۰ به عنوان یک معرف بیولوژیکی غیرخطرناک طبقه‌بندی می‌شود. با این حال، تماس مستقیم با پوست و چشم ممکن است باعث تحریک خفیف شود.

• تجهیزات حفاظتی: استفاده از دستکش و عینک ایمنی در هنگام کار با معرف توصیه می‌شود.

• نگهداری: در ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد و دور از نور نگهداری شود. فریز نکنید .

جمع‌بندی و نحوه تهیه

لیپوفکتامین ۳۰۰۰ (کد L3000-008) از Invitrogen یک کیت ترانسفکشن نسل جدید با کارایی بالا و سمیت پایین است که به لطف P3000™ Enhancer، امکان انتقال کارآمد پلاسمید DNA به سلول‌های سخت‌ترانسفکت را فراهم می‌کند. این کیت برای بیان پروتئین، ویرایش ژنوم CRISPR و تولید ویروس ایده‌آل است. نکته مهم: برای ترانسفکشن siRNA از P3000 استفاده نکنید و کیت را هرگز فریز نکنید.

برای دریافت اطلاعات تکمیلی (CoA، SDS)، استعلام قیمت و موجودی، و ثبت سفارش، از طریق وب‌سایت فروشگاه به آدرس marketchemi.ir اقدام کرده یا با کارشناسان فروش مارکت شیمی تماس بگیرید.

درباره گروه شرکت‌های کیمیاگستر و مارکت شیمی

گروه شرکت‌های کیمیاگستر با سابقه‌ای درخشان در واردات و توزیع مواد شیمیایی و تجهیزات آزمایشگاهی، و فروشگاه اینترنتی مارکت شیمی به آدرس marketchemi.ir، این محصول را با تضمین اصالت کالا از برند Invitrogen و ارائه گواهی آنالیز (CoA) معتبر، به مشتریان عرضه می‌کنند.

ارتباط با ما

• وب‌سایت فروشگاه: marketchemi.ir

• تلفن تماس: ۰۲۱-۷۷۶۲۱۵۵۱

• همراه: ۰۹۳۵۳۰۹۱۱۳۸

English Section

Product Overview

Lipofectamine™ 3000 Transfection Reagent (Catalog No. L3000-008, 0.75 mL) from Invitrogen (Thermo Fisher Scientific) is a lipid nanoparticle-based transfection kit designed for superior performance, especially in hard-to-transfect cells . The kit contains two components: Lipofectamine 3000 (cationic lipids) and P3000™ Enhancer, optimized for plasmid DNA, siRNA, and co-transfection .

Key Properties

Protocol (24-well format)

1. Seed cells to 70-90% confluency the day before transfection.

2. Tube 1: Mix 25 µL Opti-MEM™ with 0.5 µL (high efficiency) or 1.5 µL (low toxicity) Lipofectamine 3000.

3. Tube 2: Mix 25 µL Opti-MEM™ with 500 ng DNA and 1 µL P3000™.

4. Complex: Add Tube 2 to Tube 1 (1:1), incubate 10-15 min at RT.

5. Add 50 µL complex to each well; analyze after 24-48 h.

Important Notes

• P3000 is ONLY for DNA: Do not use P3000 for siRNA transfection .

• Do NOT freeze the reagent; store at 2-8°C .

• For hard-to-transfect cells, use the higher lipid dose (1.5 µL) .

• Toxicity: In sensitive cells (e.g., HBE), Lipofectamine 3000 may reduce viability; consider media change 4-6 h post-transfection .

About Market Shimi

Market Shimi Online Store (marketchemi.ir), backed by 20 years of experience, offers this product with guaranteed authenticity from Invitrogen.

Contact Us

• Online Store: marketchemi.ir

• Phone: ۰۲۱-۷۷۶۲۱۵۵۱

• Mobile: ۰۹۳۵۳۰۹۱۱۳۸

References

1. Thermo Fisher Scientific. "Lipofectamine® 3000 Reagent Protocol."

2. Thermo Fisher Scientific. "Improve lentiviral production using Lipofectamine 3000 reagent."

3. Thermo Fisher Scientific. "Transfecting Plasmid DNA Into SK-BR-3 Cells Using Lipofectamine 3000 Reagent."

4. Thermo Fisher Scientific. "Lipofectamine™ 3000 Transfection Reagent, L3000150."

5. 翌圣生物. "Lipo3000转染解密：DNA为何必加P3000？siRNA为何不用？"

6. Zhang, B. et al. "Effects of transfection on inflammatory factor production in LPS-induced HBE cells." Histol Histopathol. 2025.